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实验代做操作说明
发布时间:2017/11/22   点击次数:34次
实验代做操作说明
  操作说明
  1. 溶液准备:
  转印缓冲液:0.025M Tris base , 0.192 M甘氨酸 , 30%甲醇
  10×TBST:250mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 1.25M NaCl , 0.5%Tween20
  封闭液:1×TBST , 3%脱脂奶粉
  洗涤液:1×TBST
  2. 实验程序:
  A. 膜的准备:
  将PVDF膜切成条浸在甲醇中,室温条件下在摇床上摇1min,去除甲醇后加入1×TBST备用。
  B. 膜转印:
  1. 细胞或组织裂解液进行SDS-PAGE电泳
  2. 用夹心法电转至PVDF膜
  3. 海绵和滤纸浸泡在转印缓冲液预湿润
  4. 在半干转印系统中10v转印2h,封闭液室温封闭1h或者4℃过夜。
  C. 抗体检测:
  1. 将一抗溶解于3ml封闭液中,终浓度为4μg/ml,4℃孵育过夜。
  2. 用洗涤液洗涤3次,每次5min。
  3. 用封闭液来稀释二抗(HRP标记的抗兔或抗鼠),室温下培育1h。
  4. 用洗涤液洗涤3次,每次5min。
  5. 用化学发光底物检测。

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